Le buvard est une technique importante pour la détection de séquences spécifiques d'ADN, d'ARN et de protéines de leurs mélanges en biologie moléculaire. Il se fait à l'aide d'une membrane appelée blot. Il existe différentes techniques de transfert telles que le Northern, le Sud et l'Ouest. La sélection d'une membrane appropriée pour le processus de buvard doit être soigneusement effectuée pour empêcher la liaison non spécifique et les mauvaises détections. La nitrocellulose, le nylon et le PVDF sont des membranes couramment utilisées dans les techniques de transfert. Ils ont des caractéristiques différentes. La principale différence entre la nitrocellulose et la membrane en nylon est que Les membranes de nitrocellulose ont un potentiel d'immobilisation protéique élevée alors que Les membranes en nylon ont un potentiel d'immobilisation à l'acide nucléique élevé. Cependant, les deux types de membranes sont fréquemment utilisés dans les techniques de transfert.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce qu'une membrane de nitrocellulose
3. Qu'est-ce qu'une membrane en nylon
4. Comparaison côte à côte -Nitrocellulose vs membrane en nylon
5. Résumé
La membrane de nitrocellulose est un filtre à membrane couramment utilisé dans les techniques d'acide nucléique et de buvard. Il a un potentiel de liaison protéique élevé. Par conséquent, les membranes de nitrocellulose sont largement utilisées dans la technique de Western blot. Les membranes en nitrocellulose sont compatibles avec toutes les techniques d'hybridation et présentent des capacités de liaison supérieures sans interférences. Les membranes de nitrocellulose sont naturellement hydrophiles. Ils font une interaction hydrophile avec les molécules et les immobilisent efficacement sur la membrane. Les membranes commerciales de nitrocellulose sont disponibles en deux tailles de pores: 0.45 et 0.2 µm.
Figure 01: membrane de nitrocellulose utilisée dans Western blot
La membrane en nylon est un autre type de membrane commerciale utilisée dans les techniques de transfert. Il est alternativement utilisé avec des membranes de nitrocellulose pour le sud et le nord du Nord. Les membranes en nylon sont idéales pour le transfert du sud que la nitrocellulose en raison de leur grande affinité à la liaison avec l'ADN. En raison de plusieurs caractéristiques uniques des membranes en nylon, les chercheurs utilisent généralement des membranes en nylon pour le transfert du sud et du nord au lieu de la membrane de nitrocellulose. Les membranes en nylon sont également recommandées pour le décapage et la réprouvent, contrairement à la nitrocellulose.
Figure 02: membrane en nylon utilisée pour le transfert du sud
Nitrocellulose vs membrane en nylon | |
Les membranes de nitrocellulose sont fragiles. | Les membranes en nylon sont moins cassantes. |
Manutention | |
Ils sont difficiles à gérer. | Ils sont faciles à manipuler. |
Réprouvant | |
Les membranes de nitrocellulose non supportées sont difficiles à réprouver. | La réprouvant est facile avec les membranes en nylon. |
Compatibilité avec diverses conditions de stockage | |
Les membranes de nitrocellulose ont moins de force pour résister à diverses conditions de stockage. | Les membranes en nylon réagissent plus robuste à diverses conditions de stockage. |
Utiliser | |
Le préalté est requis. | Le préalté n'est pas requis pour les membranes en nylon. |
Nature hydrophile | |
Les membranes en nitrocellulose sont de nature hydrophile mais sont moins hydrophiles que les membranes en nylon. | Ils sont de nature hautement hydrophile. |
Potentiel d'immobilisation | |
Les membranes de nitrocellulose ont moins d'affinité pour les acides nucléiques. Mais il a une forte affinité pour les protéines. | Les membranes en nylon ont un potentiel de liaison élevé avec des acides nucléiques que les membranes de nitrocellulose. |
La nitrocellulose et les membranes en nylon sont des feuilles spéciales utilisées dans la technique de transfert pour reproduire le motif de bandes sur le gel. Ils permettent la possibilité de détecter une séquence spécifique ou une protéine des mélanges en les immobilisant sur la membrane. Une fois les molécules immobilisées sur la membrane, elle peut être utilisée comme substrat pour l'analyse d'hybridation avec des sondes marquées. La membrane de nitrocellulose est couramment utilisée pour la détection des protéines dans la technique Western blot en raison de sa forte affinité de liaison avec les protéines. Les membranes en nylon sont souvent utilisées pour le sud et le nord. C'est la différence entre la nitrocellulose et la membrane en nylon.
Les références:
1. Hayes, P. C., C. R. Loup et j. D. Foin. «Techniques de transfert pour l'étude de l'ADN, de l'ARN et des protéines.»BMJ: Journal médical britannique. U.S. Bibliothèque nationale de médecine, 14 octobre. 1989. la toile. 07 avril. 2017
2. Mahmood, Tahrin et Ping-chang Yang. «Western blot: technique, théorie et difficulté.»North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, sept. 2012. la toile. 07 avril. 2017
Image gracieuseté:
1. «Western blot transfert» de BensAccount à anglais wikipedia (CC par 3.0) via Commons Wikimedia