Quelle est la différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité

Le Différence clé entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité Est-ce que la chromatographie sur la filtration du gel dépend des différences de poids ou de taille moléculaire de l'échantillon d'analyte, tandis que la chromatographie d'affinité dépend de l'affinité d'un analyte d'un ligand immobilisé.

Le terme chromatographie en chimie analytique fait référence au processus de séparation des composants dans un mélange en utilisant différentes techniques. La chromatographie est un nom collectif qui représente un nombre divers de méthodes de séparation différentes.

CONTENU

1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que la chromatographie sur la filtration du gel 
3. Qu'est-ce que la chromatographie d'affinité 
4. Filtration du gel vs chromatographie d'affinité sous forme tabulaire
5. Résumé - Filtration du gel vs chromatographie sur l'affinité 

Qu'est-ce que la chromatographie sur la filtration du gel?

La chromatographie sur la filtration du gel est une technique analytique dans laquelle la séparation des composants dépend de la différence de poids ou de taille moléculaire. Cette technique est également connue sous le nom de chromatographie d'exclusion de taille ou de chromatographie de tamis moléculaire. La technique de séparation de ce processus dépend de la capacité différente des molécules dans l'échantillon à entrer dans les pores du milieu de filtration en gel.

Dans la technique de filtration sur gel, la phase stationnaire contient des billes de matériau hydraté en forme de éponge ayant des pores de dimensions moléculaires contenant une gamme étroite de tailles. Si nous passons une solution aqueuse composée de molécules de différentes tailles à travers une colonne contenant ces «tamis moléculaires», les molécules qui sont plus grandes que les pores du milieu de filtration se déplacent rapidement à travers la colonne. En revanche, les plus petites molécules entrent dans les pores du gel et ont tendance à se déplacer lentement à travers la colonne. Les molécules s'éteignent de la colonne dans l'ordre de la taille moléculaire décroissante. Ici, la limite d'exclusion du gel est la masse moléculaire des plus petites molécules incapables de pénétrer les pores d'un gel donné.

Il existe différents types de techniques de filtration sur gel, telles que la méthode de filtration indirecte du gel, la filtration en gel à l'état d'équilibre, la dialyse des billes de gel, etc. La chromatographie sur la filtration du gel indirect est utile pour déterminer les hormones thyroïdiennes libres. La chromatographie sur la filtration en gel à l'état d'équilibre est une technique indirecte utile principalement pour la mesure de stéroïdes libres comme le cortisol, la testostérone, etc. La dialyse des billes de gel, en revanche, est une modification de la filtration de gel à l'état d'équilibre qui est relativement plus simple.

Qu'est-ce que la chromatographie d'affinité?

La chromatographie d'affinité est une technique analytique et une méthode de séparation qui dépend d'une interaction de liaison spécifique entre un ligand immobilisé et son partenaire de liaison. Certains exemples incluent la liaison des anticorps-antigène, la liaison enzymatique-substrat et la liaison inhibiteur enzymatique. Par conséquent, cette technique a de nombreuses applications importantes dans la purification de l'acide nucléique, la purification des protéines à partir d'extraits cellulaires et la purification du sang.

Dans cette technique, la propriété la plus importante est l'immobilisation du ligand. Nous pouvons utiliser divers matériaux tels que les acrylates et le gel de silice pour cela. Il est important d'empêcher l'interférence stérique de la molécule cible au ligand. De plus, un inhibiteur est attaché à la phase solide. Nous appelons cet inhibiteur un espaceur. Classiquement, une entretoise se compose d'une chaîne d'hydrocarbures.

La phase stationnaire de la chromatographie d'affinité contient le noyau, l'espaceur et le ligand. Parfois, il a également un ion métallique qui est couplé au ligand. La phase solide la plus préférée pour la phase stationnaire de cette technique est le gel d'agarose car il est facilement distribué pour remplir et emballer la colonne avec des lits de résine de n'importe quelle taille, et il est suffisamment grand pour que les biomolécules se déroulent librement dans et à travers les perles. Les ligands peuvent se fixer de manière covalente au polymère de perle de diverses manières. Les composés d'espaceur les plus courants sont le bromure de cyanogène, l'époxyde, l'époxyde avec de l'acide C6 et la diamine. D'un autre côté, le ligand que nous pouvons utiliser diffère selon la cible, e.g., anticorps-antigène, ions de fer ou d'aluminium-phosphoprotéines, avidine-biotine, glutathion-GST, protéines chélator-his-marquées, etc.

Quelle est la différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité?

La chromatographie est une technique analytique importante. La chromatographie sur la filtration du gel et la chromatographie sur l'affinité sont deux variations importantes de la chromatographie. La principale différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité est que la chromatographie sur la filtration du gel dépend des différences de poids moléculaire ou de taille de l'échantillon d'analyte, tandis que la chromatographie d'affinité dépend de l'affinité d'un analyte d'un ligand immobilisé.

Résumé - Filtration du gel vs chromatographie sur l'affinité

Il existe différents types de techniques chromatographiques en fonction de leur application et de la nature de l'échantillon d'analyte. La filtration sur gel et la chromatographie d'affinité sont deux de ces types de techniques. La principale différence entre la filtration sur gel et la chromatographie d'affinité est que la chromatographie sur la filtration du gel dépend des différences de poids moléculaire ou de taille de l'échantillon d'analyte, tandis que la chromatographie d'affinité dépend de l'affinité d'un analyte d'un ligand immobilisé.

Référence:

1. «Filtration du gel." Un aperçu | Sujets ScienceDirect.
2. «Chromatographie d'affinité: les principes." Biotechnologie.

Image gracieuseté:

1. «Chromatographie sur la filtration sur gel» par Matasnavickas - Propre travaux (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
2. «Chromatographie Colonne» (CC0) via SVG gratuit