Différence entre T4 et T7 ADN ligase

Différence clé - T4 VS T7 ADN Ligase
 

L'ADN ligase est une enzyme importante utilisée dans les techniques de biologie moléculaire. Il fonctionne comme une colle moléculaire pour rejoindre les nucléotides en formant des liaisons phosphodester entre les nucléotides. Les liaisons de phosphodiester se forment entre l'extrémité hydroxylique 3 'de la fraction de sucre et le groupe de phosphate de 5'. L'ADN ligase est vitale dans le processus de réplication pour rejoindre les fragments d'Okazaki du brin en retard et pendant les mécanismes de réparation de l'ADN et in vitro Clonage des expériences pour rejoindre le gène souhaité d'intérêt pour le génome vectoriel. Il existe deux principales ligases d'ADN utilisées actuellement par les biologistes moléculaires: les ligases ADN T4 et T7. L'ADN Ligase T4 est l'une des premières enzymes à être isolées du bactériophage T4. T7 ADN ligase, qui est une protéine plus petite, est une enzyme isolée du bactériophage T7. C'est la principale différence entre les ligases d'ADN T4 et T7.

CONTENU

1. Aperçu et différence clé
2. Quelle est l'action de l'ADN ligase
3. Qu'est-ce que T4 ADN ligase
4. Qu'est-ce que l'ADN Ligase T7
4. Similitudes entre l'ADN ligase T4 et T7
5. Comparaison côte à côte - T4 vs ADN ligase dans la forme tabulaire
6. Résumé

Quelle est l'action de l'ADN ligase?

La ligature de l'ADN se produit dans une réaction en trois étapes. La première étape est une attaque nucléophile de l'alpha-phosphore de l'ATP générant un intermédiaire enzymatique-adénylate covalent dans lequel l'AMP est lié à l'azote à chaîne latérale terminale de la lysine. Dans la deuxième étape, une attaque nucléophile se produit sur le phosphore de l'enzyme-adénylate par le substrat d'ADN à terminaison 5'-phosphate, libérant de la lysine et formant l'ADN-adénylate. Dans la dernière étape, l'ADN-adénylate est attaqué par 3'- oh d'un autre brin d'ADN, libérant de l'ampli et rejoignant les Polynucléotides.

Qu'est-ce que T4 ADN ligase?

La ligase T4 a été la première ligase à être isolée et identifiée par Meselson, Weigle et Kellenberger et a été la toute première ligase commerciale produite. L'ADN Ligase T4 est une enzyme dépendante de l'ATP qui catalyse la formation de liaison phosphodiester. Il s'agit d'une seule chaîne polypeptidique avec 487 résidus d'acides aminés et a un poids moléculaire d'environ 77 kDa. Le pH optimal pour son activité réside dans la plage de 7.5 - 8.

Figure 01: T4 ADN Ligase

T4 ADN ligase, comme son nom l'indique, est présent dans le bactériophage T4 et a été isolé lorsque le phage a produit l'enzyme lors de l'infection par -E. coli. L'enzyme ligate du duplex d'ADN double brin avec des extrémités émoussées et les fragments à lier doivent être à proximité les uns des autres.

Qu'est-ce que l'ADN Ligase T7?

La ligase T7 est une protéine de 41 kDa produite par le bactériophage T7 et est isolée en infectant E. coli cellules. La fonction principale de la ligase T7 est de ligmenter les duplex d'ADN à travers des liaisons phosphodiester et de rejoindre des fragments à proximité d'ADN pendant les expériences de clonage. Le pH optimal pour l'ADN ligase T7 réside dans la plage de 7.0 - 7.2. T7 ligase est dépendante de l'ATP. Les ligases d'ADN T7 sont également capables de recueillir des hybrides d'ADN et d'ARN, ce qui donne naissance à des conformations anormales pendant la transcription; Cependant, ce phénomène est toujours en cours de recherche par in vitro études.

Quelles sont les similitudes entre T4 et T7 ADN ligase?

• La ligase ADN T4 et T7 participe à une réaction de ligature en recueillant des duplex d'ADN par la formation de liaison phosphodiester entre 3 'OH End et l'extrémité phosphate de 5' du fragment d'ADN.
• Les deux enzymes liguisent les duplex ADN terminés qui ont terminé qui sont à proximité les uns des autres.
• Les deux enzymes sont dépendantes de l'ATP.
• Ces enzymes sont isolées en infectant E. coli cellules avec le bactériophage particulier.
• Les applications des deux enzymes comprennent:
  • Clonage moléculaire - pour ligmenter le gène d'intérêt pour le vecteur
  • Réparation de l'ADN - pour réparer les niches à double brin
  • Réplication de l'ADN in vitro
  • Réaction en chaîne ligase

Quelle est la différence entre l'ADN Ligase T4 et T7?

Résumé - T4 vs ADN ligase T7

Les ligases d'ADN sont une classe importante d'enzymes impliquées dans le clonage moléculaire pour produire des molécules d'ADN recombinantes contenant le gène d'intérêt. La réaction de ligature est une réaction d'énergie en utilisant et il y a de nouvelles études en cours pour améliorer la précision en modulant les ligases disponibles. Les ligases d'ADN T4 et T7 sont deux types d'enzymes d'ADN ligase importantes utilisées dans les techniques biologiques moléculaires. L'ADN Ligase T7 est également le résultat d'une recherche qui était basée sur la ligase primaire isolée de T4 infectée E. coli. T7 est représenté plus d'efficacité et de précision dans l'exécution de sa fonction en raison de sa taille plus petite. C'est la différence entre T4 et T7 Ligase.

Télécharger la version PDF de T4 vs T7 ADN Ligase

Vous pouvez télécharger la version PDF de cet article et l'utiliser à des fins hors ligne selon les notes de citation. Veuillez télécharger la version PDF ici différence entre T4 et T7 Ligase.

Les références:

1. «ADN ligase, T4.”ADN Ligase, T4 - Worthington Enzyme Manual, disponible ici. Consulté le 22 août. 2017.
2. Doherty, Aidan J., et al. «Bactériophage T7 ADN ligase surexpression, purification, cristallisation et caractérisation.»Journal of Biological Chemistry, 10 mai 1996, disponible ici. Consulté le 22 août. 2017.

Image gracieuseté:

1. "Figure 3. Aid d'attelle ligature de l'ADN-ADN-ADN-ADN T4 Ligase.»(CC par 3.0) via Commons Wikimedia