Différence entre le nord du nord du sud et de l'ouest

Différence clé - Northern vs Southern vs Western blot
 

La détection de séquences spécifiques d'ADN, d'ARN et de protéines est essentielle pour divers types d'études en biologie moléculaire. L'électrophorèse sur gel est une technique qui sépare l'ADN, l'ARN et les protéines en fonction de leurs tailles. À partir des profils de gel, une séquence d'ADN particulière, une séquence d'ARN ou une protéine sont détectées par les techniques spéciales appelées transfert et hybridation avec des sondes marquées. Il existe trois types différents méthodes de transfert, à savoir le sud, le nord et l'ouest. La principale différence entre le Northern Southern et le Western blot réside dans le type de molécule qu'il détecte à partir d'un échantillon. Southern Blot est une méthode qui détecte une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN. Northern blot est une technique qui détecte une séquence d'ARN spécifique à partir d'un échantillon d'ARN. Western blot est une méthode qui détecte une protéine spécifique d'un échantillon de protéines.

CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que Southern Blot
3. Qu'est-ce que Northern Blot
4. Qu'est-ce que Western blot
5. Comparaison côte à côte - Northern vs Southern vs Western blot
6. Résumé

Qu'est-ce que Southern Blot?

La technique du Southern Blot a été développée par E. M. Southern en 1975 pour l'identification d'une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN. Ceci est la première technique de transfert introduite en biologie moléculaire. Il a permis la détection de gènes spécifiques de l'ADN, des fragments spécifiques de l'ADN, etc. Il y a plusieurs étapes impliquées dans la technique de Southern Bloting. Ils sont les suivants.

1. L'ADN est isolé de l'échantillon et digéré avec des endonucléases de restriction.
2. L'échantillon digéré est séparé par électrophorèse sur gel d'agarose.
3. Les fragments d'ADN dans le gel sont dénaturés en brins simples par l'utilisation d'une solution alcaline.
4. L'ADN simple brin est transféré dans une membrane filtrante de nitrocellulose par transfert capillaire.
5. L'ADN transféré est fixé sur la membrane en permanence.
6. L'ADN fixe sur la membrane est hybridé avec des sondes marquées.
7. L'ADN non lié est lavé de la membrane en lavant.
8. Le film à rayons X est exposé à la membrane et une autoradiographie est préparée.

Southern blot est appliqué pour différents aspects de la biologie moléculaire. Il est utile dans la cartographie RFLP, les études médico-légales, la méthylation de l'ADN dans l'expression des gènes, la détection de gènes mutés dans les troubles génétiques, l'empreinte digitale de l'ADN, etc.

Figure 01: Technique de transfert du Sud

Qu'est-ce que Northern Blot?

Northern blot est une méthode conçue pour détecter une séquence d'ARN spécifique ou une séquence d'ARNm d'un échantillon pour étudier l'expression du gène. Cette technique a été développée par Alwine, Kemp et Stark en 1979. Il diffère des techniques de transfert de Sourthern et Western en raison de plusieurs étapes. Cependant, cette technique est également effectuée via une électrophorèse sur gel, un buvardage et une hybridation avec des sondes et une détection marquées spécifiques. La technique de transfert de Northern est effectuée comme suit.

1. L'ARN est extrait de l'échantillon et séparé par électrophorèse sur gel.
2. L'ARN est transféré du gel sur une membrane buvard et fixe.
3. La membrane est traitée avec une sonde marquée préparée à partir d'ADNc ou d'ARN (la sonde est complémentaire à une séquence spécifique dans l'échantillon).
4. La sonde est incubée avec la membrane pour se lier avec une séquence spécifique.
5. Les sondes non liées sont lavées.
6. Des fragments hybrides sont détectés par une autoradiographie.

Le Northern Blot est un outil important dans la détection et la quantification de l'ARNm hybridé, l'étude de la dégradation de l'ARN, l'évaluation de la demi-vie de l'ARN, la détection de l'épissage d'ARN, l'étude de l'expression des gènes, etc.

Figure 02: Northern blot

Qu'est-ce que Western blot?

Western blot est une méthode de détection d'une protéine spécifique d'un mélange de protéines par l'utilisation d'anticorps marqués. Par conséquent, Western blot est également connu comme un immunoblot. Cette technique a été introduite par Towbin et al en 1979 et il est désormais régulièrement réalisé dans les laboratoires pour l'analyse des protéines. Les étapes sont les suivantes.

1. Les protéines sont extraites de l'échantillon
2. Les protéines sont séparées par leurs tailles en utilisant l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide
3. Les molécules séparées sont transférées dans une membrane PVDF ou une membrane de nitrocellulose par électroporation
4. La membrane est bloquée pour la liaison non spécifique avec les anticorps
5. Les protéines transférées sont liées à l'anticorps primaire (anticorps marqués enzymatiques).
6. La membrane est lavée pour éliminer les anticorps primaires liés non spécialement
7. Des anticorps liés sont détectés en ajoutant un substrat et en détectant le précipité coloré formé

Western blot est utile dans la détection des anticorps anti-VIH dans un échantillon de sérum humain. Western blot peut également être utilisé comme test de confirmation pour l'infection par l'hépatite B et le test définitif pour la maladie de la vache folle.

Figure 03: Western blot

Quelle est la différence entre le Northern Southern et l'Ouest?

Résumé - Northern vs Southern vs Western blot

Le transfert est une technique spéciale développée pour l'identification d'ADN, d'ARN ou de protéine spécifique à partir des échantillons. Il existe trois procédures de buvard distinctes, à savoir Nord, Southern et Western, pour détecter un type spécifique de molécule. La technique de Northern Blot est conçue pour détecter une séquence d'ARN spécifique à partir d'un mélange d'ARN. La technique de transfert de Southern permet la détection d'une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN et une technique Western blot est développée pour identifier une protéine spécifique à partir d'un mélange de protéines.

Les références
1. Gibbons, Janay. «Western blot: aperçu du transfert de protéines.»North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, Mar. 2014. la toile. 27 mars. 2017
2. Brun, t. "Southern Blot.»Protocoles actuels en immunologie. U.S. Bibliothèque nationale de médecine, mai 2001. la toile. 27 mars. 2017
3. Lui, Shan L. «Northern blot.»Méthodes en enzymologie. U.S. Bibliothèque nationale de médecine, 2013. la toile. 27 mars. 2017

Image gracieuseté:
1. «Northern blot schéma» par RNA405 - propre travail (domaine public) via Commons Wikimedia
2. «Western blot 114a» par Amanthabagdon - propre travail (domaine public) via Commons Wikimedia