Différence entre électrophorèse de gel horizontal et vertical

Différence clé - électrophorèse de gel horizontal vs
 

L'électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire utilisée dans la génétique pour séparer les mélanges contenant de l'ADN, de l'ARN et d'autres protéines en fonction de leur charge respective et de leur taille moléculaire. L'ADN, l'ARN ou les protéines qui doivent être séparés dans cette méthode sont exécutés à travers un gel qui contient de petits pores. Les molécules sont entraînées à travers le gel par un champ électrique. Les molécules traversent les pores du gel, et la vitesse du mouvement est inversement proportionnelle à leurs longueurs respectives. Par conséquent, les molécules de taille moléculaire inférieure se déplaceront plus rapidement que les molécules avec un poids moléculaire plus élevé. Le champ électrique est généré par la différence en charge à deux extrémités du gel. Une extrémité contient une charge positive, et l'autre extrémité contient une charge négative. Étant donné que les molécules d'ADN et d'ARN sont chargées négativement, elles seront attirées vers l'extrémité positivement chargée du gel. L'électrophorèse sur gel peut être de deux méthodes différentes: électrophorèse sur gel horizontale et électrophorèse de gel vertical. Dans l'électrophorèse de gel horizontal, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon de course continu qui est présent à l'intérieur de la boîte de gel elle-même. Dans l'électrophorèse sur gel vertical, le système tampon est orienté verticalement et est discontinu avec deux chambres présentes en haut et en bas avec une cathode et une anode, respectivement. C'est la principale différence entre l'électrophorèse de gel horizontal et vertical.

CONTENU

1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que l'électrophorèse de gel horizontal
3. Qu'est-ce que l'électrophorèse de gel vertical
4. Similitudes entre électrophorèse de gel horizontal et vertical
5. Comparaison côte à côte - électrophorèse de gel horizontal vs sous forme tabulaire
6. Résumé

Qu'est-ce que l'électrophorèse de gel horizontal?

L'électrophorèse de gel horizontal utilise la théorie de base pour la séparation de l'ADN, de l'ARN ou des molécules de protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaires respectives. Dans cette technique, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon qui est continu. Le gel d'agarose est utilisé pour séparer la boîte de gel en deux compartiments. Une extrémité de la boîte de gel contient une anode tandis que l'autre extrémité contient une cathode. Lorsqu'un courant est appliqué, le tampon utilisé dans cette technique permet la création d'un gradient de charge. Lorsque la charge est appliquée, le gel a tendance à chauffer. Le tampon fonctionne également comme un liquide de refroidissement, qui maintient la température à des niveaux optimaux. La recirculation du tampon de course empêche la formation d'un gradient de pH. Un système de tampon discontinu ne peut pas être utilisé dans une électrophorèse sur gel horizontale car les deux compartiments du système de gel sont connectés avec le tampon d'exécution. L'acrylamide est utilisé pendant l'électrophorèse sur gel pour séparer les mélanges de protéines.

Figure 01: électrophorèse sur gel horizontale

Dans l'électrophorèse de gel horizontal, l'acrylamide ne peut pas être utilisé car la boîte de gel est exposée à l'oxygène. En raison de la présence d'oxygène, la polymérisation de l'acrylamide est inhibée, et cela interfère avec la formation du gel. L'électrophorèse sur gel horizontale est une méthode sans effort qui est utilisée dans la séparation de l'ADN et de l'ARN.

Qu'est-ce que l'électrophorèse de gel vertical?

La technique de l'électrophorèse de gel vertical fonctionne selon la théorie principale de l'électrophorèse sur gel, mais elle est considérée comme plus complexe que la méthode d'électrophorèse de gel horizontale. Cette technique utilise un tampon discontinu. Une cathode est située dans la chambre supérieure et l'anode est située dans la chambre inférieure. Les électrodes présentes dans chaque compartiment fournissent le champ électrique requis. Une fine couche de gel est versée entre les deux plaques de verre montées. Par conséquent, la partie supérieure du gel est immergée dans la chambre supérieure, et la partie inférieure du gel est immergée dans la chambre en bas. Une fois le courant appliqué, une petite partie du tampon se déplace vers la chambre inférieure de la chambre supérieure à travers le gel. Le courant appliqué dans cette technique est d'unités minuscules.

Figure 02: électrophorèse sur gel vertical

Dans l'électrophorèse sur gel vertical, le tampon s'écoule uniquement à travers le gel. Cela permet un contrôle précis du gradient de tension pendant le stade de séparation. Le gel d'acrylamide peut être utilisé car les compartiments ne sont pas exposés à l'oxygène atmosphérique. En raison de la taille des pores plus petite du gel d'acrylamide, une séparation précise peut être obtenue avec une résolution plus élevée.

Quelles sont les similitudes entre l'électrophorèse de gel horizontal et vertical?

• Les deux systèmes fonctionnent selon la théorie de base de l'électrophorèse sur gel.
• L'anode et la cathode sont utilisées pour fournir le champ électrique requis dans les deux systèmes.

Quelle est la différence entre l'électrophorèse de gel horizontal et vertical?

Résumé - Électrophorèse de gel horizontal vs

L'électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire largement utilisée dans la séparation des mélanges contenant des molécules d'ADN, d'ARN et de protéines. Il existe deux méthodes d'électrophorèse sur gel: l'électrophorèse de gel horizontale et verticale. Dans l'électrophorèse de gel horizontal, le tampon de course est continu alors que dans l'électrophorèse de gel vertical, il est discontinu. C'est la différence entre l'électrophorèse de gel horizontal et vertical. Les deux systèmes fonctionnent selon le principe commun de l'électrophorèse sur gel.

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Les références:

1.Warren, Chad M., et al. «Électrophorèse de gel d'agarose vertical et électro-surboucheur de protéines de poids moléculaire élevé.”Electrophorèse, Vol. 24, non. 11, 2003, pp. 1695-1702., doi: 10.1002 / ELPS.200305392.
2.«Systèmes de gel horizontaux et verticaux - le système de gel horizontal.»Diagnostics nationaux, disponibles ici. Consulté le 28 août. 2017.

Image gracieuseté:

1. «Appareil d'électrophorèse sur gel» de Jeffrey M. Vinocur - propre travail (CC par 2.5) Via Commons Wikimedia
2. «Électrophorèse sur gel de polyacrylamide des protéines» par Jean-Etienne Minh-Duy Poirrier de Bruxelles, Belgique - Protéines dans une électrophorèse sur gel 1D (CC By-SA 2.0) via Commons Wikimedia