Différence entre l'AFLP et RFLP

Mattéo Leroux

Différence clé - AFLP vs rflp

Les études ADN ont une immense importance dans la compréhension et la détermination des relations phylogénétiques, le diagnostic des maladies génétiques et la cartographie des génomes de l'organisme. Plusieurs techniques associées à l'analyse d'ADN sont également utilisées pour l'identification d'un gène particulier ou d'une séquence d'ADN dans un pool d'ADN inconnu. Ils sont connus sous le nom de marqueurs moléculaires. Polymorphisme de longueur de fragment amplifiée (Aflp) et Polymorphisme de longueur de fragment de restriction (RFLP) sont deux de ces marqueurs moléculaires (méthodes) développées en biologie moléculaire pour détecter la variation génétique entre les organismes. Les deux méthodes sont tout aussi importantes et présentent des avantages et des inconvénients. La principale différence entre AFLP et RFLP est que L'AFLP implique une amplification sélective de PCR de l'ADN digéré tandis que le RFLP n'implique pas d'amplification de PCR sélective des fragments d'ADN.

CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que l'AFLP
3. Qu'est-ce que RFLP
4. Comparaison côte à côte - AFLP vs rflp
5. Résumé

Qu'est-ce que l'AFLP?

L'AFLP (polymorphisme de longueur de fragment amplifiée) est un outil important en biologie moléculaire et est largement utilisé dans l'analyse de la variation génétique. L'AFLP est basé sur l'amplification PCR spécifique de l'ADN génomique fragmenté et la détection du polymorphisme par autoradiographie via l'électrophorèse sur gel. L'AFLP contribue largement à identifier les différences génétiques dans les souches ou les espèces étroitement apparentées de divers royaumes, notamment les plantes, les animaux, les bactéries et les champignons. L'AFLP peut être effectué avec de petites quantités d'échantillons d'ADN inconnus. Il ne nécessite pas de connaissances préalables et de conception de sondes.

Étapes de l'AFLP

Isolement de l'ADN
Digestion de l'ADN avec des endonucléases de restriction
Ligature des fragments d'ADN restreints avec des adaptateurs
Amplification sélective des fragments avec des sites de restriction spécifiques
Séparation des produits PCR par électrophorèse sur gel
Visualisation de la matrice de gel par autoradiographie

L'AFLP est une méthode plus sensible et reproductible qui peut être utilisée dans le profilage d'ADN de plusieurs taxons, notamment des champignons, des bactéries, des plantes et des animaux sans connaissance préalable des séquences d'ADN. Il aide à identifier de légères différences entre les individus dans les populations en raison de sa nature très sensible. L'AFLP est également importante dans la cartographie du génome, les études médico-légales, les tests parentaux, le génotypage, etc.

Figure 01: AFLP

Qu'est-ce que RFLP?

Les polymorphismes de longueur de fragment de restriction (RFLP) sont une technique utilisée pour détecter les variations génétiques des séquences d'ADN homologues. C'est la première méthode développée pour le profilage d'ADN. Les organismes ont des empreintes digitales d'ADN ou des profils ADN uniques. Le RFLP sert d'outil important pour analyser la variation entre les profils d'ADN des organismes intraspécifiques ou étroitement liés, car les séquences homologues ont des sites de restriction différents (emplacements) qui sont uniques à un organisme particulier. Lorsque l'ADN homologue est digéré avec des endonucléases de restriction spécifiques, il se traduira par différents profils d'ADN qui sont uniques à chaque individu. Par conséquent, le principal de cette méthode est la détection de la variation génétique entre les organismes en restreignant l'ADN homologue avec des enzymes de restriction spécifiques et l'analyse du polymorphisme de la longueur des fragments via l'électrophorèse sur gel et le transfert. Les motifs de transfert sont uniques à chaque organisme et caractérisent les génotypes spécifiques.

Étapes de rflp

Isolement d'une quantité suffisante d'ADN à partir d'échantillons
Fragmentation des échantillons d'ADN avec des endonucléases de restriction spécifiques en séquence courte
Séparation des fragments résultants avec différentes longueurs par électrophorèse sur gel d'agarose.
Transfert du profil de gel dans une membrane par Southern Blot
Hybridation de la membrane avec des sondes marquées et analyse du polymorphisme de longueur de fragment dans chaque profil

Le RFLP est une technique très importante pour détecter l'héritage des maladies et trouver le risque de la maladie parmi les membres de la famille. Le RFLP est également fréquemment utilisé dans la cartographie du génome, l'identification des criminels en médecine légale, tests de paternité, etc. RFLP a également plusieurs limites. RFLP nécessite la connaissance préalable des données de séquence pour concevoir des sondes pour l'hybridation. Il nécessite également l'isolement d'une quantité suffisante d'ADN de l'échantillon à analyser, ce qui est difficile dans les études médico-légales.

Figure 01: mappage RRFLP

Quelle est la différence entre AFLP et RFLP?

ALFP vs rflp
L'AFLP implique une amplification de PCR sélective de l'ADN digéré.	RFLP n'implique pas de PCR à moins qu'il ne soit PCR-RFLP.
Connaissances de séquence
Les connaissances de séquence antérieure ne sont pas requises.	Des connaissances de séquence antérieure sont nécessaires pour concevoir des sondes RFLP.
Fiabilité
C'est plus fiable.	C'est moins fiable par rapport à l'AFLP.
Efficacité dans la détection du polymorphisme
Cela a une efficacité plus élevée dans la détection du polymorphisme que RFLP.	C'est moins efficace par rapport à l'AFLP.
Coût
C'est un peu cher par rapport à RFLP.	C'est moins cher par rapport à l'AFLP.
Applications
AFLPS ont été appliqués à la cartographie du génome, à l'empreinte digitale d'ADN, aux études de diversité génétique, aux tests de paternité et à la criminalistique	L'analyse RFLP est un outil important dans la cartographie du génome, la localisation des gènes pour les troubles génétiques, la détermination du risque de maladie et les tests de paternité.

Résumé - AFLP vs rflp

L'AFLP et le RFLP sont deux techniques utilisées comme marqueurs génétiques pour l'évaluation de la diversité et de l'évaluation des relations génétiques en biologie moléculaire. L'AFLP sert de méthode efficace et sensible pour la détection du polymorphisme génétique entre les organismes que RFLP. Cependant, bien que ces deux méthodes aient une efficacité différente dans la détection des variations génétiques, elles sont toujours utilisées pour les empreintes digitales de l'ADN et le diagnostic de la maladie.

Référence:
'1. Garcia, Antonio A. F., Luciana L. Benchimol, antônia m. M. Barbosa, Isaias O. Geraldi, Souza Jr. Cláudio l., et Aete P. De souza. «Comparaison des marqueurs RAPD, RFLP, AFLP et SSR pour les études de diversité dans les lignes consanguines du maïs tropical.»Génétique et biologie moléculaire. Sociedade Brasileira de Génética, 2004. la toile. 19 mars. 2017
2. «Polymorphisme de longueur de fragment de restriction (RFLP).»Information du Centre national pour la biotechnologie. U.S. Bibliothèque nationale de médecine, n.d. la toile. 19 mars. 2017
3. Masiga D. K. et Turner C. M. (2004). «Analyse du polymorphisme de longueur de fragment amplifiée (restriction)». Méthodes Mol Biol: 270: 173-86. NCBI. la toile. 19 mars. 2017

Image gracieuseté:
1. «Alfp» par Barbarossa à Dutch Wikipedia - transféré de NL.Wikipedia aux communes. (Domaine public) via Commons Wikimedia
2. «Mapping RFLP» par Retama - Propre travaux (GFDL) via Commons Wikimedia