Différence entre la trypsinisation chaude et froide
Différence clé - chaud vs Froid Trypsinisation
La trypsinisation chaude et froide est deux méthodes utilisées dans la désagrégation enzymatique des cellules dans la culture des cellules animales. Le différence clé Entre la trypsinisation chaude et froide, comme le suggèrent les noms, dépend de la température à laquelle la trypsine est ajoutée pour la désagrégation cellulaire. La trypsinisation chaude a lieu dans des conditions de température plus élevées (36.5 - 37 0C) tandis que la trypsinisation froide se déroule dans des conditions à basse température.
Au cours du processus de culture des cellules primaires des cellules animales, il existe trois méthodes principales utilisées et se sont avérées réussir. Les trois méthodes incluent la désagrégation mécanique des cellules, la désagrégation enzymatique des cellules et la technique d'exploration primaire. La désagrégation enzymatique des cellules conduisant à l'isolement des cellules et elle se fait par l'enzyme dégradante de la protéine trypsine. Par conséquent, ce processus est connu sous le nom de trypsization. La trypsinisation peut être effectuée dans deux conditions différentes, à savoir la trypsinisation chaude et la trypsinisation froide. La trypsinisation chaude est la méthode de traitement des cellules avec de la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36.5 - 37 0C. La trypsinisation froide est le processus de traitement de la trypsine qui se déroule dans des conditions plus froides de préférence dans la glace en maintenant des températures très basses.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que la trypsinisation chaleureuse
3. Qu'est-ce que la trypsinisation froide
4. Similitudes entre la trypsinisation chaude et froide
5. Comparaison côte à côte - Trypsinisation chaude vs froide sous forme tabulaire
6. Résumé
Qu'est-ce que la trypsinisation chaleureuse?
La trypsinisation peut être effectuée pour désagréger les composants cellulaires afin d'isoler les cellules pour produire une culture cellulaire primaire. La trypsine est une enzyme de dégradation des protéines, et le mélange enzymatique utilisé dans la trypsinisation peut être soit un extrait brut ou un produit purifié. L'extrait brut serait plus efficace dans la lyse des protéines et la désintégration des cellules car il contient d'autres enzymes dégradées.
La trypsinisation chaude est la méthode enzymatique la plus couramment utilisée pour la désagrégation cellulaire qui a lieu dans des conditions de température plus élevées. Avant le traitement par trypsinisation, le tissu souhaité est coupé en petits morceaux. Il facilite le processus de désagrégation facile. Le tissu haché est ensuite lavé dans un milieu spécial connu sous le nom de milieu de sel basal de dissection.
À l'achèvement de l'étape de lavage, les cellules sont transformées en un ballon contenant l'enzyme active, qui est la trypsine. Comme cette technique implique un protocole de trypsinisation chaude, la trypsine est placée à une température d'environ 37 0C pendant environ quatre heures.
Figure 01: trypsine
Le contenu est mélangé et agité en utilisant des méthodes de centrifugation pour la facilité du protocole et pour accélérer le processus de désagrégation. Une fois le temps recommandé atteint, les cellules peuvent être dérivées du surnageant. Les cellules dérivées du surnageant sont ensuite incubées à une température et un temps particuliers.
Qu'est-ce que la trypsinisation froide?
La trypsinisation froide est l'autre type de trypsinisation qui se déroule dans des conditions froides. Dans cette technique, les cellules qui sont hachées et lavées sont placées dans des flacons sur de la glace puis trempées avec de la trypsine. La période de trempage est beaucoup plus longue - environ 6 à 24 heures.
Une fois la procédure de trempage terminée, la trypsine est retirée du lysat cellulaire et les morceaux de tissu sont en outre incubés à 37 0C pendant environ 20 à 30 minutes. La désagrégation des cellules est provoquée par une pipetage répétée du mélange tissulaire. Cela permettra aux cellules de se dissocier de la membrane et de venir au surnageant. Une fois les cellules dans le surnageant, elles sont incubées et cultivées à une température et une période souhaitées.
La méthode de la trypsinisation froide présente plusieurs avantages
- Un rendement plus élevé de cellules viables à mesure que les dommages cellulaires sont minimisés. Les dommages cellulaires sont minimisés en n'utilisant pas les étapes de centrifugation.
- Méthode très pratique.
- Moins laborieux.
La principale limitation de la méthode de la trypsinisation froide est que les grandes quantités ne peuvent pas être utilisées dans un cas.
Quelles sont les similitudes entre la trypsinisation chaude et froide?
- Les processus de trypsinisation chauds et froids utilisent la trypsine enzymatique pour la désagrégation des cellules.
- Les processus de trypsinisation chauds et froids sont utilisés dans les procédures de culture cellulaire pour la désagrégation des cellules.
- Dans les procédures de traitement de la trypsinisation chaude et froide, les cellules sont dérivées du surnageant.
Quelle est la différence entre la trypsinisation chaude et froide?
Trypsinisation chaude vs froide | |
| La trypsinisation chaude est la méthode de traitement des cellules avec de la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36.5 - 37 0. | La trypsinisation froide est le processus de traitement de la trypsine qui se déroule dans des conditions plus froides de préférence dans la glace en maintenant des températures très basses. |
| Protocole | |
| Les morceaux de tissus hachés sont maintenus à 37 0C en continu tout au long de la procédure. | Les morceaux de tissus hachés sont initialement maintenus à des températures glaciales, puis maintenus à 37 0. |
| Température | |
| La trypsinisation chaude se produit à 36.5 - 37 0 | La trypsinisation froide se produit à des températures glaciales. |
| Le temps consommé | |
| Temps moindre requis pour tout le processus (environ 4 heures) de trypsinisation chaude. | Temps plus long requis (environ 6 à 24 heures) pour la trypsinisation froide. |
| Rendement de cellules viables | |
| Trypsinisation chaude faible. | Haute en trypsization froide. |
| Utilisation de la centrifugation | |
| Une centrifugation est nécessaire pour la désagrégation des cellules dans la trypsinisation chaude. | La centrifugation n'est pas requise dans la trypsinisation froide. |
| Quantité tissulaire initiale pour la trypsinisation | |
| Une plus grande quantité de tissu peut être utilisée dans la trypsinisation chaude. | Une plus petite quantité de tissu peut être utilisée dans la trypsinisation froide. |
| Dommages aux cellules | |
| Élevé en raison de la centrifugation dans la trypsinisation chaude. | Moins à cause de la trypsinisation froide. |
Résumé - Chaud vs Froid Trypsinisation
La trypsinisation est la méthode d'utilisation de l'enzyme dégradant les protéines trypsine pour la désagrégation et la préparation des cultures de cellules primaires pendant le processus de culture cellulaire. Il existe deux techniques principales de trypsinisation basées sur les températures utilisées pendant la procédure. Ils sont une trypsinisation chaude et froide. La trypsinisation chaude est réalisée à 37 0C alors que la trypsinisation froide est réalisée dans des conditions glaciales. Bien que la trypsinisation froide prend plus de temps pour l'achèvement, il a un rendement plus élevé de cellules viables. Cela est dû au fait que les dommages cellulaires sont minimisés dans la trypsinisation froide car il n'utilise pas d'étapes de centrifugation vigoureuses. C'est la différence entre la trypsinisation chaude et froide.
Référence:
1.«Trypsinisation.”TRYPSINISATION - Un aperçu | Sujets ScienceDirect. Disponible ici
2.«Culture cellulaire primaire: 3 techniques (avec diagramme).»Discussion en biologie, 16 octobre. 2015. Disponible ici
Image gracieuseté:
1.'Trypsine Active Site' par fdardel - Propre travaux, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
