Différence entre Sybr Green et Taqman

Différence clé - Sybr Green vs Taqman
 

SYBR Green et Taqman sont deux méthodes utilisées pour détecter ou regarder le processus d'amplification de la PCR en temps réel. SYBR Green est une méthode basée sur le colorant de coloration à l'acide nucléique intercalant tandis que Taqman est une méthode basée sur la sonde d'hydrolyse. Les deux technologies sont conçues pour générer une fluorescence pendant la PCR, ce qui permet à la machine de PCR en temps réel de surveiller la réaction en «temps réel». La méthode SYBR Green est réalisée à l'aide d'un colorant fluorescent appelé SYBR Green et détecte l'amplification en liant le colorant à l'ADN produit à double brin. Taqman est réalisé à l'aide de sondes à double marquage et détecte l'amplification par dégradation de la sonde par Taq polymérase et relâche du fluorophore. C'est la principale différence entre Sybr Green et Taqman.

CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que Sybr Green
3. Qu'est-ce que Taqman
4. Comparaison côte à côte - Sybr Green vs Taqman
5. Résumé

Qu'est-ce que Sybr Green?

SYBR Green est un colorant fluorescent utilisé pour colorer les acides nucléiques, en particulier l'ADN double brin en biologie moléculaire. La méthode SYBR Green est utilisée pour quantifier les produits de PCR pendant la PCR en temps réel. Une fois qu'il se lie à l'ADN, le complexe d'ADN résultant absorbe la lumière bleue et émet une lumière verte intense. Cela se produit en raison du changement structurel qui se produit dans la molécule de colorant lors de la liaison avec l'ADN double brin. Lorsque la PCR crée de plus en plus d'ADN, plus de molécules de colorant se lient à l'ADN, générant plus de fluorescence. Par conséquent, la fluorescence augmente avec l'accumulation du produit PCR. Par conséquent, la quantité de produit de PCR peut être mesurée quantitativement par la détection de fluorescence verte SYBR.

Le colorant vert SYBR peut également être utilisé pour le marquage d'ADN dans la cytométrie et la microscopie fluorescente. Le bromure d'éthidium a été remplacé avec succès par SYBR Green car le bromure d'éthidium est un colorant cancérigène avec des problèmes d'élimination pendant la visualisation de l'ADN dans l'électrophorèse sur gel.

Il y a des avantages et des inconvénients de la méthode SYBR Green. Cette méthode est très sensible, peu coûteuse et facile à utiliser. Cependant, en raison de sa capacité à se lier à tout ADN double brin, la liaison non spécifique peut conduire à une quantification excessive du produit PCR.

Figure 01: technique SYBR Green

Qu'est-ce que Taqman?

Taqman est une méthode alternative à SYBR Green pour surveiller le processus de PCR en temps réel. Cette méthode dépend de l'activité d'exonucléase 5 '- 3' de l'enzyme Taq polymérase pour dégrader les sondes pendant l'extension du nouveau brin et la libération de fluorophore. Des sondes à double marquage sont utilisées dans cette méthode et elle est basée sur l'hydrolyse des sondes. Les sondes sont des oligonucléotides d'ADN marqués par fluorescence ayant une molécule de rapporte fluorescente (fluorophore) à l'extrémité 5 'et une molécule exhabiteuse à l'extrémité 3'. Ils sont conçus pour se lier au modèle simple brin du côté opposé de l'amorce recuit. La polymérase Taq ajoute des nucléotides à l'amorce et étend le nouveau brin vers les sondes à double marque. Une fois que la Taq polymérase rencontre la sonde, l'action d'exonucléase de la Taq polymérase active et dégrade la sonde. Une fois qu'il a terminé la synthèse du nouveau brin, la sonde est soumise à une dégradation complète et à libérer le fluorophore. La libération de fluorophore génère une fluorescence. La molécule exhabiteuse fluorescente éteint efficacement la lumière émise et crée la sortie pour la quantification du produit PCR. La libération de fluorophores et la quantité des produits PCR sont proportionnelles. Par conséquent, la quantification peut être facilement effectuée par la méthode Taqman.

Figure 02: Méthode Taqman

La méthode Taqman est utilisée en PCR en temps réel, quantification de l'expression des gènes, détection des polymorphismes génétiques, quantification des délétions de l'ADN chromosomique, identification bactérienne, vérification de l'analyse des puces à ADN, génotypage SNP, etc.

Quelle est la différence entre Sybr Green et Taqman?

Résumé - Sybr Green et Taqman

Taqman et Sybr Green sont deux méthodes employées dans la PCR en temps réel (PCR quantitative). Les deux méthodes permettent efficacement la quantification du produit PCR et s'appuient sur l'émission de la fluorescence. La méthode Taqman utilise des sondes à double marquage pour la détection de l'ADN accumulé tandis que la méthode SYBR Green utilise un colorant fluorescent. Ces deux méthodes ont également des applications différentes en biologie moléculaire.

Référence:
1. Tajadini, Mohamad Hasan, Mojtaba Panjehpour et Shaghayegh Haghjooy Javanmard. «Comparaison des méthodes SYBR Green et Taqman dans l'analyse quantitative de réaction en chaîne en polymérase en temps réel de quatre sous-types de récepteurs d'adénosine.«Recherche biomédicale avancée. MedKnow Publications & Media Pvt Ltd, 2014. la toile. 13 mars. 2017.
2. «Principes de base de la PCR en temps réel.«PCR en temps réel, quantitatif (qpcr), amorces et mastermix: PrimerDesign Ltd. N.p., n.d. la toile. 13 mars. 2017.
3. «Sybr Green et d'autres colorants de PCR en temps réel.»Biocompare. N.p., 05 avril. 2010. la toile. 14 mars. 2017

Image gracieuseté:
1. «PCR avec Sybr Green» par -ygonaar 23:09, 7 mars 2006 (UTC) - C'est un graphique créé par Ygonaar avec Power Point, CC BY-SA 3.0, https: // communes.wikimedia.org / w / index.php?curid = 619528
2. «Taqman» par l'utilisateur: BrainDamaged - propre travail (domaine public) via Commons Wikimedia