La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une méthode d'amplification d'ADN qui est utilisée dans les applications biologiques moléculaires. Il s'agit d'une technique couramment utilisée qui fait des millions à des milliards d'exemplaires d'une séquence d'ADN particulièrement intéressée. C'est un in vitro Méthode réalisée dans les laboratoires. La technique de PCR dépend totalement de l'ADN polymérase produite dans le commerce appelé Taq polymérase. Et cela nécessite également plusieurs autres composants et un bon entretien de température. Un composant important est les amorces. Les amorces sont les séquences d'ADN courtes spécialement conçues pour la séquence d'ADN cible. Ils ont généralement environ 20 nucléotides de longueur. Taq polymérase catalyse l'ajout de nucléotides dans une séquence nucléotidique préexistante. Par conséquent, les amorces sont servies de points de départ de la synthèse de nouveaux volets. La polymérase Taq ne fonctionne que dans la direction de 5 'à 3', d'où la synthèse d'ADN se produit dans la même direction de 5 'à 3'. Étant donné que l'ADN est double brin, deux types d'amorces sont nécessaires en PCR. Ils sont connus sous le nom d'amorce avant et d'amorce inversé. Les amorces vers l'avant et inverse sont appelées en fonction de la direction de l'allongement de l'amorce dans l'ADN lorsque la synthèse de l'ADN se produit. L'amorce vers l'avant recuit avec le brin d'ADN antisens et initie la synthèse du brin + ve du gène en direction de 5 'à 3'. L'amorce inverse recuit avec le brin de sens et initie la synthèse du brin complémentaire du brin de codage; qui est le brin du gène dans la direction de 5'to 3 '. C'est le différence clé entre les amorces avant et inverse.
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce qu'un apprêt vers l'avant
3. Qu'est-ce qu'un apprêt inversé
4. Similitudes entre l'amorce avant et inverse
5. Comparaison côte à côte - amorce vers l'inverse dans la forme tabulaire
6. Résumé
L'orientation vers l'avant est la synthèse du brin de codage ou du brin de sens d'un gène. Taq polymérase catalyse la synthèse d'un nouveau brin dans une direction de 5 'à 3'. La synthèse du brin de codage se produit lorsque l'amorce recuit avec le brin non codant ou antisens et s'allonge dans une direction de 5 'à 3'.
Figure 01: amorces avant et inverse
L'amorce qui recuit avec le brin antisens ou le brin non codant ou le brin de modèle est connue sous le nom d'amorce avant puisque l'amorce avant agit comme un point de départ à la synthèse du codage ou du brin positif du gène. L'amorce vers l'avant a une courte séquence nucléotidique qui est complémentaire à l'extrémité flanquante du brin antisens. Il hybride avec le brin antisens et facilite la Taq polymérase pour ajouter des nucléotides complémentaires du brin de matrice.
L'amorce inverse est la séquence d'ADN courte qui recuit avec l'extrémité 3 'du brin de sens ou le brin de codage. L'amorce inverse sert de point de départ pour synthétiser un brin complémentaire de la séquence codante ou de la séquence non codante. L'amorce inverse est conçue complémentaire à l'extrémité 3 'du brin de codage. Par conséquent, il recuit avec l'extrémité flanquante 3 'du brin de codage et permet à Taq polymérase de synthétiser le brin antisens ou le brin de modèle. Étant donné que son orientation est de manière inversée, cette amorce est étiquetée comme un amorce inverse.
Les amorces inversées et vers l'avant sont importantes pour la production de millions à des milliards d'exemplaires de régions particulières d'ADN qui sont ciblées ou intéressées.
Amorce avant vs amorce inverse | |
L'amorce avant est la séquence d'ADN courte qui s'hybride avec l'extrémité 3 'du non-codage ou le brin de modèle du gène et sert de point de départ pour synthétiser la séquence de codage. | L'amorce inverse est la séquence d'ADN courte qui s'hybride avec l'extrémité 3 'du codage ou le brin non contenu et sert de point de départ pour synthétiser la séquence non codante. |
Brand de recuit | |
L'amorce avant recuit avec un brin de modèle. | L'amorce inverse recuit avec le brin non conteste. |
Nouvelle séquence qui en résulte | |
L'amorce avant facilite la synthèse de la séquence de codage. | L'amorce inverse facilite la synthèse de la séquence non codante. |
Il existe deux types d'amorces impliquées dans la technique de PCR. Ils sont des amorces en avant et en arrière. Sur la base de l'allongement de l'amorce dans une nouvelle synthèse de brin d'ADN, ces amorces sont étiquetées ou nommées. Taq polymérase synthétise le nouvel ADN en orientation de 5 'à 3'. Par conséquent, les amorces sont conçues comme complémentaires à 3 'extrémités des doubles brins. L'amorce avant qui s'allonge dans une direction de 5 'à 3' s'hybride avec l'extrémité 3 'de l'antisens ou du modèle ou de la séquence non codante. Il sert de point de départ pour synthétiser la séquence de codage. L'amorce inverse qui s'allonge dans la direction de 5 'à 3' s'hybride avec l'extrémité 3 'du codage ou le non-chaire ou le brin de sens. Il sert de point de départ pour synthétiser la séquence non codante. C'est la différence entre l'amorce avant et inverse.
1.«Primer (biologie moléculaire).»Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20 février. 2018. Disponible ici
2.«Réaction en chaîne par polymérase (PCR).”Khan Academy. Disponible ici
1.'Primers Revcomp a melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - propre travail, (cc by-sa 3.0) via Commons Wikimedia