Différence entre le clonage et le sous-clonage

Différence clé - Clonage vs sous-clonage
 

Le clonage et le sous-clonage sont des procédures biologiques moléculaires qui créent des cellules ou des organismes génétiquement identiques portant l'ADN ou le gène qui intéressent. Le clonage est une technique qui implique l'insertion du gène ou de l'ADN intéressé dans un vecteur, la réplication de celui-ci dans une bactérie hôte et la production de cellules ou d'organismes qui sont des copies exactes de la composition génétique. Le sous-clonage est une technique qui implique l'insertion du gène d'intérêt, qui est déjà inséré dans un vecteur, dans un vecteur secondaire, la réplication dans une bactérie hôte et la production de copies génétiquement identiques de cellules ou d'organismes. La principale différence entre le clonage et le sous-clonage est que, En clonage, le gène d'intérêt, une fois ligaturé dans un vecteur, continue le processus de clonage tandis que, dans le sous-clonage, le gène d'intérêt déjà cloné est séparé du vecteur parent et inséré dans un vecteur receveur et continue le processus.

CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que le clonage
3. Qu'est-ce que le sous-clonage
4. Comparaison côte à côte - Clonage vs sous-clonage
5. Résumé

Qu'est-ce que le clonage?

Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques. Dans la nature, le clonage se produit au moyen de la reproduction asexuée. Lorsqu'il n'y a pas de recombinaison génétique ou d'altération, les cellules filles reçoivent la même composition génétique du parent. Les organismes procaryotes et eucaryotes créent des clones par fission binaire, bourgeonnement, mitose, etc.  En biologie moléculaire, des gènes de clonage ou des fragments spécifiques de l'ADN est une méthode populaire pour étudier la structure et la fonction de cette section ADN particulière.

L'objectif principal du clonage moléculaire est de faire des millions de copies de cellules ou d'organismes génétiquement identiques portant le fragment d'ADN d'intérêt (principalement des gènes). Il crée des organismes avec des copies génétiques exactes d'un autre. Principalement, des gènes spécifiques sont clonés dans des études moléculaires pour obtenir des informations structurelles et fonctionnelles et pour le séquençage de l'ADN. De plus, pour la production de protéines ou de produits spécifiques à grande échelle, le clonage est largement utilisé.

Procédure de clonage

Les étapes de base de la procédure de clonage sont les suivantes.

1. Identification et isolement du gène d'intérêt. (Amplification du gène d'intérêt par PCR).
2. La digestion des restrictions du gène d'intérêt (restriction en endonucléase coupe le gène).
3. Digestion des restrictions de l'ADN vectoriel. (L'ADN vectoriel est également coupé en utilisant la même endonucléase de restriction).
4. Insertion du gène dans le vecteur et formation de la molécule recombinante.
5. Transformation du vecteur recombinant en bactérie hôte.
6. L'isolement et l'identification des bactéries transformées (le vecteur plasmidique doit contenir un gène sélectionnable, le plus souvent un gène de résistance aux antibiotiques pour dépister les bactéries transformées).
7. Expression des gènes recombinants au sein de l'hôte.

Figure_01: procédure de clonage

Qu'est-ce que le sous-clonage?

Le sous-clonage est une procédure de déplacement d'un gène d'intérêt d'un vecteur à un autre vecteur pour voir l'expression du gène pour gagner la fonctionnalité souhaitée du gène. Dans cette méthode, deux vecteurs sont impliqués; à savoir, vecteur parent et vecteur de destination. Les inserts clonés sont à nouveau déplacés dans un deuxième vecteur de sous-clonage. L'objectif de transférer le gène du premier vecteur au deuxième vecteur est d'obtenir quelque chose qui ne pouvait pas être fait par le premier vecteur ou de séparer à nouveau un gène dans le fragment déjà cloné de l'ADN et l'exprimer seul. Les enzymes de restriction sont utilisées dans cette procédure au début.

Procédure de sous-clonage

Les étapes de base du sous-clonage sont les suivantes.

1. Avec l'aide des endonucléases de restriction, la séparation de l'ADN d'intérêt pour le plasmide donneur (vecteur parent).
2. Amplification de l'ADN d'intérêt en utilisant PCR.
3. Purification du produit PCR (ADN d'intérêt) par électrophorèse sur gel.
4. Ouverture du plasmide receveur par la même restriction endonucléases utilisées pour séparer l'ADN d'intérêt pour le plasmide parent.
5. Ligature de l'ADN d'intérêt (gène) dans le plasmide receveur pour créer le plasmide sous-cloné.
6. Transformation du vecteur sous-cloné en une bactérie hôte compétente.
7. Dépistage des cellules transformées.
8. Purification de l'ADN plasmidique et utilisation pour le séquençage d'ADN ou l'expression des gènes pour obtenir les produits souhaités.

Le sous-clonage est effectué à des occasions d'isolement un gène du groupe cloné de gènes ou lorsque le gène d'intérêt est nécessaire pour transférer dans un plasmide utile pour voir la fonction exacte du gène d'intérêt.

Figure_02: Procédure de sous-clonage

Quelle est la différence entre le clonage et le sous-clonage?

Résumé - Clonage vs sous-clonage

Le clonage crée des cellules ou des organismes génétiquement identiques avec le gène ou l'ADN d'intérêt inséré. Il passe par la séparation et l'insertion de l'ADN d'intérêt dans un vecteur et l'expression au sein d'une bactérie hôte. Sous-clonage partage des étapes similaires avec le clonage. Cependant, dans le sous-clonage, le fragment d'ADN déjà cloné (gène d'intérêt) est inséré dans un vecteur et transformé en bactérie hôte. C'est la principale différence entre le clonage et le sous-cllonage.

Les références

1. Lodish, Harvey. «Clonage d'ADN avec des vecteurs plasmidiques.«Biologie des cellules moléculaires. 4e édition. U.S. Bibliothèque nationale de médecine, 01 janvier. 1970. la toile. 05 mars. 2017
2. «Sous-clonage." Wikipédia. Fondation Wikimedia, 14 février. 2017. la toile. 06 mars. 2017
3. «Sous-clonage.”Sous-clonage | Articles à accès ouvert | Journaux en libre accès | Actes de conférence | Éditeurs | Auteurs | Critiques | événements scientifiques. N.p., n.d. la toile. 06 mars. 2017
4. Wackerhage, Henning. «Comment sous-clone."Comment se sous-clone. N.p., 01 janvier. 1970. la toile. 06 mars. 2017

Image gracieuseté

1. Procédure de clonage moléculaire - par CNX OpenStax [CC par 4.0], via Wikimedia Commons
2. Procédure de sous-clonage - par le téléchargeur d'origine était le takomètre à l'anglais Wikipedia (transféré de EN.Wikipedia aux communes.) [CC par 2.5], via Wikimedia Commons