Différence entre chromatofocusing et focalisation isoélectrique
Le différence clé entre chromatofocusing et focalisation isoélectrique Le chromatofocusage est un type de méthode de chromatographie sur colonne qui utilise des résines d'échange d'ions tandis que la focalisation isoélectrique est un type de technique d'électrophorèse qui utilise des gels de gradient de pH immobilisé.
Chromatofocusing et la focalisation isoélectrique sont deux techniques qui séparent les protéines en fonction de leurs points isoélectriques. Chromatofocusing et la focalisation isoélectrique ont une grande puissance de résolution. Le chromatofocusage est une méthode de chromatographie sur colonne à haute résolution tandis que la mise au point isoélectrique est une méthode de séparation électrophorétique. De plus, le chromatofocusage n'utilise pas de champ électrique tandis que la focalisation isoélectrique a besoin d'un champ électrique.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que le chromatofocusant
3. Qu'est-ce que la focalisation isoélectrique
4. Similitudes entre le chromatofocusant et la focalisation isoélectrique
5. Comparaison côte à côte - Chromatofocusing vs isoélectrique Focus sous forme tabulaire
6. Résumé
Qu'est-ce que le chromatofocusant?
Le chromatofocusage est un type de chromatographie à haute élution qui sépare les protéines en fonction des différences dans leur point isoélectrique. Il utilise une colonne de résine d'échange d'ions et un gradient de pH développé en interne. Contrairement à la focalisation isoélectrique, le chromatofocusage n'implique pas de champ électrique. Le chromatofocusage est une puissante technique de purification qui peut résoudre les molécules très similaires, même ne diffèrent que de 0.02 unités de pH. Par conséquent, le chromatofocusage est le mieux adapté comme une étape de polissage finale lorsque une résolution élevée est nécessaire pour séparer les composants très similaires.
Dans chromatofocusing, l'échantillon est appliqué à la colonne en le mélangeant avec le tampon de démarrage. Les protéines qui sont à un pH au-dessus de leur point isoélectrique sont chargées négativement et elles restent près du sommet de la colonne tandis que d'autres protéines qui sont au pH sous leur point isoélectrique, migrent dans la colonne. La protéine avec le point isoélectrique le plus élevé est éluée en premier tandis que la protéine avec le point isoélectrique le plus bas est éluée en dernier à partir de la colonne. Cette technique est affectée par plusieurs facteurs tels que les précipitations des protéines et la linéarité du gradient de pH.
Qu'est-ce que la focalisation isoélectrique?
La focalisation isoélectrique est une technique qui sépare différentes molécules en fonction de leur point isoélectrique. Il est également connu sous le nom d'électrofocusant. Cette technique est souvent utilisée pour la séparation des protéines dans un gel. Dans la focalisation isoélectrique, l'échantillon est ajouté dans des gels de gradient de pH immobilisées (IPG). Le gel IPG est une matrice de gel acrylamide copolymérisée avec un gradient de pH. Les protéines migrent vers la cathode jusqu'à ce qu'ils trouvent la région de pH de leurs points isoélectriques. Lorsqu'une protéine atteint le pH qui n'a pas de charge nette, la migration cesse et donne une bande stationnaire. De même, chaque protéine donne une bande à un point du gradient de pH correspondant à son point isoélectrique.
Figure 01: Focus isoélectrique
La focalisation isoélectrique est la première étape de l'électrophorèse sur gel bidimensionnelle. Dans cette technique, les protéines sont d'abord séparées en fonction de leurs points isoélectriques par la focalisation isoélectrique, puis séparées par leur poids moléculaire par SDS-PAGE.
Quelles sont les similitudes entre le chromatofocusant et la focalisation isoélectrique?
- Chromatofocusing et la focalisation isoélectrique sont deux méthodes très résolues.
- Les deux sont basés sur le point isoélectrique des protéines.
- Ces techniques utilisent un gradient de pH.
- Les deux procédures sont informatives pour la caractérisation des variantes de l'hémoglobine humaine.
- Ils peuvent résoudre les molécules où les valeurs PI diffèrent en aussi peu que 0.02 unités de pH.
Quelle est la différence entre le chromatofocusant et la focalisation isoélectrique?
Le chromatofocusage est une technique de chromatographie à colonne à haute résolution qui sépare les protéines en fonction de leur point isoélectrique. En revanche, la focalisation isoélectrique est une technique électrophorétique qui sépare les protéines en fonction de leur point isoélectrique par l'application d'un champ électrique le long d'un gradient de pH formé dans un capillaire. C'est donc la principale différence entre le chromatofocusant et la focalisation isoélectrique.
Une autre différence entre le chromatofocusant et la focalisation isoélectrique est que le chromatofocusage n'implique pas de champ électrique tandis que la focalisation isoélectrique a besoin d'un champ électrique.
Résumé - Chromatofocusing vs focalisation isoélectrique
Le chromatofocusage et la focalisation isoélectrique sont deux techniques similaires qui ont une capacité de résolution élevée des molécules, en particulier des molécules très similaires. Le chromatofocusage est une technique de chromatographie à colonne à haute résolution tandis que la focalisation isoélectrique est une méthode d'électrophorèse. Le chromatofocusage n'implique pas de champ électrique, contrairement à la mise au point isoélectrique. Ainsi, cela résume la différence entre le chromatofocusant et la focalisation isoélectrique.
Référence:
1. «Chromatofocusing: principes et méthodes.”Sigma, disponible ici.
2. «Focus isoélectrique». En.Wikipédia.Org, 2020, disponible ici.
Image gracieuseté:
1. «Isoelectric Focusing Contribute2» par MRBEAN427 - Propre travaux (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
