Quelle est la différence entre FPLC et HPLC

Le différence clé FPLC et HPLC est que le FPLC est un type de chromatographie liquide qui purifie de grandes biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides, tandis que le HPLC est un type de chromatographie liquide qui sépare les composés de faible poids moléculaire.

La chromatographie liquide est une technique utilisée pour séparer un échantillon en ses composants individuels. Cette séparation se produit en raison de l'interaction d'échantillons spécifiques avec des phases mobiles et stationnaires. Les composants d'un échantillon sont séparés en fonction de l'affinité de chaque composant pour la phase mobile en chromatographie liquide. Au fur et à mesure que la phase mobile et l'échantillon passent à travers une colonne, les composants de l'échantillon commencent à se séparer en bandes qui peuvent être détectées par spectroscopie UV-Vis. Par conséquent, FPLC et HPLC sont deux types de techniques de chromatographie liquide.

CONTENU

1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que FPLC 
3. Qu'est-ce que HPLC
4. Similitudes - FPLC et HPLC
5. FPLC vs HPLC sous forme tabulaire
6. Résumé - FPLC vs HPLC

Qu'est-ce que FPLC?

Le FPLC est un type de chromatographie liquide qui purifie de grandes biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides. Le Chromatographie liquide à protéines rapides (FPLC) a été développé et commercialisé pour la première fois en Suède par Pharmacia Company en 1982. Il est souvent utilisé pour analyser ou purifier les mélanges de protéines. Cela se déroule sur la base du principe des affinités des composants de l'échantillon pour le fluide en mouvement (phase mobile) et un matériau solide poreux (phase stationnaire). Dans FPLC, la phase mobile est un tampon, et la phase stationnaire est une résine composée de perles. Il se compose généralement d'une agarose réticulée emballée dans un verre cylindrique ou une colonne en plastique.

Figure 01: Appareil FLPC (Chromatographie liquide à protéine rapide)

Dans la plupart de la stratégie FLPC, la résine d'échange d'ions est utilisée. Par conséquent, la protéine d'intérêt se liera à la résine par une interaction de charge. La technique FLPC utilise également deux tampons: le tampon 1 (le tampon de course) et le tampon 2 (le tampon d'élution). Initialement, lorsque le tampon d'exécution et le mélange d'échantillons traversent la colonne, la protéine d'intérêt pour le mélange se liera à la résine par une interaction de charge. Mais la protéine d'intérêt se dissocie et revient à la solution dans le tampon d'élution lorsque le tampon d'élution traverse la colonne à la fin du processus. Plus tard, la solution (éluant qui contient des protéines d'intérêt) passe par deux détecteurs, qui mesurent la concentration en sel et la concentration en protéines. Comme chaque protéine est éluée, elle apparaît comme un «pic» pendant la détection et peut être collectée pour une utilisation ultérieure.

Qu'est-ce que HPLC?

HPLC est un type de chromatographie liquide qui sépare les composés de faible poids moléculaire. En 1969, le premier HPLC a été fabriqué commercialement par Waters Corporation, USA. Dans la chromatographie liquide haute performance (HPLC), un mélange d'échantillons (analyte) dans un solvant (phase mobile) est pompé à travers une colonne avec un matériau d'emballage chromatographique (phase stationnaire) à haute pression. Le mélange d'échantillon est transporté par un flux de gaz porteur en mouvement d'hélium ou d'azote.

Figure 02: HPLC (chromatographie liquide haute performance)

Les composants du mélange d'échantillons qui ont le moins d'interaction avec la phase stationnaire ou la plus grande quantité d'interaction avec la phase mobile quittera la colonne plus rapidement. D'un autre côté, les composants du mélange d'échantillons qui ont le plus d'interaction avec la phase stationnaire ou le moins d'interaction avec la phase mobile quittera la colonne plus lentement. Sur la base du principe d'interaction ci-dessus, les composants du mélange d'échantillon peuvent être séparés. De plus, le détecteur d'instruments identifie chaque composant du mélange d'échantillon qui quitte la colonne. Le HPLC est utilisé pour inspecter les échantillons environnementaux et biologiques pour la présence ou l'absence de composés connus, tels que les médicaments, les toxines ou les pesticides. Il est utilisé dans différentes industries comme la pharmaceutique, l'environnement, la criminalistique et les produits chimiques.

Quelles sont les similitudes entre FPLC et HPLC?

1. FPLC et HPLC sont des types de chromatographie liquide.
2. Les deux sont utilisés pour séparer et identifier les échantillons biologiques.
3. Ils ont une phase mobile liquide et une phase stationnaire solide.
4. Les deux techniques utilisent une colonne pour traverser l'échantillon.
5. Ces techniques utilisent des pompes, détecteurs, vannes et logiciels pour la séparation et la détection des échantillons.

Quelle est la différence entre FPLC et HPLC?

Le FPLC est un type de chromatographie liquide qui est utilisé pour purifier les grandes biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides. HPLC est un type de chromatographie liquide qui est utilisée pour séparer les composés de faible poids moléculaire. C'est donc la principale différence entre FPLC et HPLC. De plus, FPLC utilise des moniteurs de pH et de conductivité aussi bien que les collecteurs de fraction. En revanche, HPLC n'utilise pas de pH et de moniteurs de conductivité et de collecteurs de fraction.

L'infographie ci-dessous répertorie plus de différences entre FPLC et HPLC sous forme tabulaire.

Résumé - FPLC vs HPLC

La chromatographie est une technique analytique de laboratoire utilisée pour la séparation des composants d'un mélange. Il est divisé en plusieurs types tels que la chromatographie sur colonne, la chromatographie en phase gazeuse, la chromatographie liquide, la chromatographie d'échange d'ions, etc. FPLC et HPLC sont deux types de techniques de chromatographie liquide. Le FPLC est un type de chromatographie liquide qui est utilisé pour purifier les grandes biomolécules telles que les protéines, les nucléotides et les peptides. D'un autre côté, le HPLC est un type de chromatographie liquide qui est utilisé pour séparer les composés de faible poids moléculaire. Ainsi, c'est le résumé de la différence entre FPLC et HPLC.

Référence:

1. «Chromatographie liquide à protéines rapides.»Information-médicale.net, 25 janvier. 2019.
2. «Qu'est-ce que la chromatographie liquide HPLC / haute performance?”Laborat, 11 mai 2021.

Image gracieuseté:

1. «Appareil de chromatographie» par GIAC83 - Propre travaux (CC BY-SA 2.5) Via Commons Wikimedia
2. «HPLC» par Sam.F. - Propre travail (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia