Différence entre Klenow et T4 ADN polymérase

Le différence clé Entre l'ADN polymérase de Klenow et T4 est que Le fragment Klenow est un grand fragment de E. coli L'ADN polymérase 1 tandis que l'ADN polymérase T4 est l'ADN polymérase 1 du bactériophage T4.

Les ADN polymérases sont des enzymes qui catalysent la formation d'ADN en ajoutant des désoxyribonucléotides à l'extrémité 3'-OH d'une amorce préexistante. Il existe différents types d'ADN polymérases. La plupart des ADN polymérases utilisées en biologie moléculaire sont des ADN polymérases procaryotes. Le fragment klenow et l'ADN polymérase T4 sont deux types d'ADN polymérases qui ont une origine procaryote. Le fragment de klenow est le grand fragment généré par le clivage de E.coli L'ADN polymérase 1 en deux fragments par la protéase bactérienne subtilisine. L'ADN polymérase T4 est l'ADN polymérase 1 du bactériophage T4. L'ADN polymérase Klenow et T4 ont toutes deux une polymérase de 5 '→ 3' et une activité d'exonucléase 3 '→ 5'. Ils manquent tous les deux d'activité d'exonucléase de 5 '→ 3', ce qui les rend plus adaptés à de nombreuses applications en biologie moléculaire.

CONTENU

1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que Klenow 
3. Qu'est-ce que l'ADN polymérase T4
4. Similitudes entre klenow et ADN polymérase T4
5. Comparaison côte à côte - Klenow vs ADN polymérase dans la forme tabulaire
6. Résumé

Qu'est-ce que Klenow?

Le fragment de klenow est une ADN polymérase utile en biologie moléculaire. Quand E. coli L'ADN polymérase 1 subit une digestion protéolytique par protéase bactérienne, subtilisine, il en résulte deux fragments: l'un est un grand fragment, et l'autre est un petit fragment. Le fragment Klenow est le grand fragment de 68 kDa. Le fragment Klenow a 5 '→ 3' polymérase et 3 '→ 5' exonucléase (relecture) Activités de l'ADN Pol I. L'activité d'exonucléase 3 '→ 5' du fragment de Klenow facilite l'élimination des bases mal ajoutées à mesure que la polymérisation progresse. Le fragment de klenow ne contient pas d'activité d'exonucléase de 5 '→ 3', qui est montré par pleine longueur ou intact E. coli ADN polymérase 1. Il est avantageux lorsque seule l'activité de polymérisation est nécessaire seule. Des fragments de klenow sont utilisés pour remplir 5 'surplombs, synthèse de sondes, séquençage de l'ADN, synthèse d'ADN double brin, synthèse de l'ADNc Second Strand et mutagenèse dirigée sur le site.

Figure 01: fragment Klenow

Dans certaines applications, l'activité d'exonucléase 3 '→ 5' du fragment de Klenow devient également indésirable. Il peut être supprimé en introduisant une mutation au gène qui code pour le fragment de klenow. Le fragment Klenow résultant est connu sous le nom de fragment d'exo-klenow. Par conséquent, le fragment exo-klenow n'a que l'activité polymérase de 5 '→ 3' de E. coli polymérase 1.

Qu'est-ce que l'ADN polymérase T4?

L'ADN polymérase T4 est une ADN polymérase qui catalyse la synthèse de l'ADN. C'est une protéine codée par bactériophage t4. Structurellement, l'ADN polymérase T4 est une protéine de résidu d'acide aminé 898 (poids moléculaire de 103.6 kDa). Il nécessite un modèle et un apprêt pour catalyser la synthèse.

Figure 02: ADN polymérase T4

Semblable au fragment Klenow, l'ADN polymérase T4 a à la fois des activités d'exonucléase de 5 '→ 3' et 3 '→ 5'. De plus, il manque également de 5 '→ 3'. L'ADN polymérase T4 est utile dans la remplissage des extrémités de répartition des fragments d'ADN. Il est également souvent utilisé à 5'-End ou 3'-End-Letling d'ADN double brin. L'ADN polymérase T4 est fréquemment utilisée dans le clonage émoussé. L'activité d'exonucléase (relecture) de 3 '→ 5' de l'ADN polymérase T4 est plus forte (plus de 200 fois) que le fragment de Klenow. Plus important encore, l'ADN polymérase T4 a une procédure élevée (400 nucléotides par seconde).

Quelles sont les similitudes entre Klenow et T4 ADN polymérase?

• Klenow et ADN polymérase T4 sont deux polymérases procaryotes.
• Les deux polymérases ont une polymérase de 5 '→ 3' et une activité d'exonucléase 3 '→ 5'.
• Ils ne présentent pas d'activité d'exonucléase 5 '→ 3'.
• Les deux enzymes nécessitent un modèle et une amorce pour catalyser la synthèse de l'ADN.
• Ces enzymes peuvent être inactivées par la chaleur à 75 ⁰

Quelle est la différence entre Klenow et T4 ADN polymérase?

La principale différence entre Klenow et l'ADN polymérase T4 est l'origine de chaque enzyme. Le fragment de klenow est originaire d'une bactérie tandis que l'ADN polymérase T4 provient d'un bactériophage qui est un virus. L'ADN polymérase T4 a une processeur élevée que le fragment de klenow. De plus, l'ADN polymérase T4 a une forte activité de relecture que le fragment Klenow. Ainsi, c'est une autre différence entre l'ADN polymérase de Klenow et T4.

L'info-graphique ci-dessous répertorie plus de différences entre Klenow et T4 ADN polymérase sous forme tabulaire.

Résumé - Klenow vs ADN polymérase T4

Le fragment Klenow est un grand fragment de e. Coli ADN polymérase 1. Il n'a que 5 '→ 3' polymérase et 3 '→ 5' Exonucléase Activités. Il manque de 5 '→ 3' d'activité d'exonucléase de l'intact E. coli ADN pol 1. Par conséquent, le fragment de klenow est une polymérase bactérienne. D'un autre côté, l'ADN polymérase T4 est une polymérase codée par le bactériophage T4. Semblable au fragment Klenow, il contient à la fois des activités de 5 '→ 3' polymérase et 3 '→ 5', et il n'a pas 5 '→ 3'. Cependant, l'ADN polymérase T4 a une procédure élevée et une activité de relecture élevée que le fragment Klenow. C'est donc la principale différence entre Klenow et T4 ADN polymérase.

Référence:

1. «ADN polymérase, T4.”ADN polymérase, T4 - Worthington Enzyme Manual, disponible ici.
2. Rittié, Laure et Bernard Perbal. «Enzymes utilisées en biologie moléculaire: un guide utile.»Journal of Cell Communication and Signaling, Springer Netherlands, juin 2008, disponible ici.

Image gracieuseté:

1. «Polymerasondomains» - Banque de données protéiques (domaine public) via Commons Wikimedia 

2. «T4-DNA-polymérase» par ChemPro - J. Wang, P. Yu, t. C. Lin, W. H. Konigsberg, t. UN. Steitz (1996). «Structures cristallines d'un fragment NH2-terminal de l'ADN polymérase T4 et de ses complexes avec de l'ADN simple brin et avec des ions métalliques divalents» Biochimie 35: 8110-8119. Doi: 10.1021 / BI960178R. (CC0) via Commons Wikimedia